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常見(jiàn)問(wèn)答

體外診斷試劑的主要類型和技術(shù)原理?

體外診斷試劑被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)科研與臨床檢驗(yàn)中,因質(zhì)量穩(wěn)定、效果可靠,其不但為科研和診療提供了依據(jù),也為疾病的預(yù)防、控制提供了技術(shù)資料。


體外診斷試劑品類繁多,涉及眾多學(xué)科門類,因?qū)W科間交叉現(xiàn)象日漸增多、新技術(shù)層出不窮,很難以某個(gè)原則為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其簡(jiǎn)單分類。從臨床專業(yè)角度可將其分為臨床血液學(xué)體液檢驗(yàn)類試劑、臨床化學(xué)類試劑、臨床免疫學(xué)試劑,及微生物學(xué)、細(xì)胞組織學(xué)、分子生物學(xué)試劑等;從方法學(xué)角度可將其分為化學(xué)顯色法、免疫比濁法、酶聯(lián)免疫法、膠體金法、免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光試劑、分子生物學(xué)試劑、免疫組化試劑、免疫細(xì)胞化學(xué)試劑等。


臨床生化試劑主要用于配合半自動(dòng)和全自動(dòng)生化分析儀等儀器進(jìn)行檢測(cè)。常用的臨床生化試劑所采用的分析方法和技術(shù)原理有多種,具體介紹如下。




光譜分析技術(shù) 


該技術(shù)是基于物質(zhì)與輻射能作用時(shí),測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)間躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射所具有的波長(zhǎng)和強(qiáng)度,從而進(jìn)行分析的方法。按作用對(duì)象的不同,光譜分析技術(shù)可分為原子光譜法(測(cè)量離子、微量元素等)和分光光度法;按獲得方式的不同,該技術(shù)可分為吸光光度法和發(fā)射光譜法。


吸光光度法是根據(jù)溶液中物質(zhì)對(duì)光選擇性吸收的特性進(jìn)行分析的方法。有色溶液對(duì)光線有選擇性吸收的特性,不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)不同,對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收能力不同,每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜。當(dāng)一定波長(zhǎng)的光通過(guò)該物質(zhì)的溶液時(shí),根據(jù)物質(zhì)對(duì)光的吸收程度(吸光度)求出該物質(zhì)含量的方法稱為吸光光度法。


吸光光度法可分為比色法和分光光度法兩大類。比色法又可分為目視比色法和光電比色法。分光光度法與光電比色法的原理類似,都是通過(guò)光電池或光電管測(cè)量溶液透光度的強(qiáng)度,來(lái)進(jìn)行分析的方法。


當(dāng)利用比色法測(cè)定溶液中的某種化學(xué)成分時(shí),通常需加入顯色劑,使其產(chǎn)生有色化合物,顏色的深淺與待測(cè)化學(xué)成分的含量成正比,可據(jù)此測(cè)定待測(cè)物的濃度。


發(fā)射光譜法是通過(guò)測(cè)量物質(zhì)的發(fā)射光譜的波長(zhǎng)和強(qiáng)度,來(lái)進(jìn)行定性和定量分析的方法。


許多物質(zhì)是光致發(fā)光的,即它們可吸收電磁輻射,然后重新發(fā)射出相同或更長(zhǎng)波長(zhǎng)的輻射。光致發(fā)光最常見(jiàn)的類型是熒光和磷光。利用熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法稱為熒光法。在熒光分析中,待測(cè)物質(zhì)分子成為激發(fā)態(tài)時(shí)所吸收的光稱為激發(fā)光,處于激發(fā)態(tài)的分子回到基態(tài)時(shí)所產(chǎn)生的熒光稱發(fā)射光。熒光法測(cè)定的是待測(cè)物質(zhì)分子受光激發(fā)后所發(fā)射的熒光的強(qiáng)弱,而不是測(cè)激發(fā)光的強(qiáng)弱。凡能產(chǎn)生熒光的化合物均可采用熒光分析法來(lái)進(jìn)行定性或定量測(cè)量。


散射光譜技術(shù)是測(cè)定光線通過(guò)溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程度的一類定量測(cè)量方法,主要用于免疫檢測(cè)系統(tǒng)中,常稱免疫濁度法。


電化學(xué)分析法 


利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)測(cè)定化學(xué)電池的電位、電流或電量變化來(lái)進(jìn)行分析的方法稱電化學(xué)分析法。電化學(xué)分析法有多種,測(cè)定原電池電動(dòng)勢(shì)以求物質(zhì)含量的分析方法稱為電位法或電位分析法;通過(guò)對(duì)電阻的測(cè)定以求物質(zhì)含量的分析法稱為電導(dǎo)法;借助某些物理量的突變作為滴定分析終點(diǎn)的指示,稱為電容量分析法。目前在臨床中應(yīng)用的電化學(xué)分析法主要是離子選擇電位分析法,該方法利用電極電位及溶液內(nèi)活性物質(zhì)兩者間的關(guān)系來(lái)進(jìn)行分析。


從方法學(xué)角度,可將臨床免疫診斷試劑分為免疫比濁法(在散射光譜技術(shù)中已介紹)、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光等不同類型。


酶聯(lián)免疫法 


該技術(shù)是將酶高效催化反應(yīng)的專一性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合的一種免疫標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)。其原理是,將酶與抗體或抗原結(jié)合成酶標(biāo)記結(jié)合物,酶標(biāo)記結(jié)合物既保留了抗原或抗體的免疫學(xué)活性,又保留了酶對(duì)底物的催化活性,在酶標(biāo)記抗體與抗原的特異性反應(yīng)完成后,加入酶作用的相應(yīng)底物,通過(guò)酶催化底物完成顯色反應(yīng),對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性和定量測(cè)定。


免疫熒光技術(shù) 該技術(shù)是利用物質(zhì)吸收光能后產(chǎn)生激發(fā)態(tài)而發(fā)光的特性,將具有這種特性的熒光素用化學(xué)方法結(jié)合在特異的抗體或抗原上,又不損害其抗體或抗原活性的一種熒光顯微鏡下的示蹤技術(shù)。


流式細(xì)胞術(shù) 


該技術(shù)是對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子膜表面及內(nèi)部的成分進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段,它可高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)。同傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比,該方法具有速度快、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)。


膠體金技術(shù) 


該技術(shù)可按照液體的流動(dòng)形式分為膠體金免疫滲濾試驗(yàn)和膠體金免疫層析試驗(yàn)。


化學(xué)發(fā)光免疫分析 


該技術(shù)是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合,用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩部分。


臨床分子生物學(xué)診斷試劑即通常所說(shuō)的基因診斷試劑,其采用的技術(shù)原理主要包括核酸分子雜交技術(shù)、DNA測(cè)序技術(shù)、基因芯片技術(shù)等。


核酸分子雜交技術(shù) 該技術(shù)也稱基因探針技術(shù),是利用核酸的變性、復(fù)性和堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理,用已知的探針序列檢測(cè)樣本中是否含有與之配對(duì)的核苷酸序列的技術(shù)。該技術(shù)是臨床應(yīng)用最早、最基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù),是印跡雜交、基因芯片等技術(shù)的基礎(chǔ)。


DNA序列分析 


該分析技術(shù)是分子生物學(xué)重要的基本技術(shù)。以某測(cè)序儀為例,其采用4種熒光染料分別標(biāo)記終止物或引物,經(jīng)Sanger測(cè)序反應(yīng)后,反應(yīng)產(chǎn)物帶有不同的熒光標(biāo)記。一個(gè)樣品的4個(gè)測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)物可在同一泳道內(nèi)電泳,從而降低測(cè)序泳道間遷移率差異對(duì)精確性的影響。通過(guò)電泳將各個(gè)熒光標(biāo)記片段分開(kāi),同時(shí),激光檢測(cè)器同步掃描,激發(fā)的熒光經(jīng)光柵分光,以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色熒光,并在CCD攝影機(jī)上同步成像。電腦可在電泳過(guò)程中對(duì)儀器運(yùn)行情況進(jìn)行同步檢測(cè),結(jié)果能以電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等方式輸出。此方法測(cè)序?yàn)橐淮鷾y(cè)序的基本原理。


高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序的革命性改變,可一次性對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定。第二代測(cè)序技術(shù)將片段化的基因組DNA兩側(cè)連上接頭,隨后用不同的方法產(chǎn)生幾百萬(wàn)個(gè)空間固定的PCR克隆陣列。目前該技術(shù)已發(fā)展到第三代測(cè)序技術(shù),即單分子測(cè)序技術(shù)。

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